2.1.1.1.PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO Y ESTERILIZACION
fresco (entre 15 y 25°), con poca humedad y
protegidos de la luz solar directa. Nunca se deben almacenar cerca de
autoclaves, hornos, ni otra fuente de calor o vapor. Los medios de cultivo
deshidratados son higroscópicos. Cuando los envases de estos medios de cultivo
deshidratados son abiertos para su uso inicial, se debe tener la precaución de
cerrarlos tan pronto como sea posible y mantenerlos bien cerrados para prevenir
la entrada de humedad. La absorción de agua produce cambios de pH, formación de
grumos, decoloraciones del polvo, etc., lo cual indica que deben ser
descartados porque pueden haber sufrido cambios químicos o estar contaminados.
Una vez que el medio de cultivo ha sido preparado y esterilizado, puede
almacenarse a temperatura ambiente por un periodo máximo de 2 semanas protegido
de la luz, o por periodos mayores a 12 -15ºC. Sin embargo, almacenados bajo
refrigeración entre 2 y 8°C se prolonga la vida útil de los mismos, (nunca por
debajo de 0ºC porque se destruye la estructura del gel). Los medios de cultivo
se deben mantener en recipientes bien cerrados para evitar su deshidratación y
cuando se usa tapón de algodón, se debe colocar por encima una envoltura de
papel (Craft). Otro punto importante a tomar en cuenta, es que cada lote de
medio de cultivo preparado debe pasar por un riguroso proceso de control de
calidad, en donde se determinan sus propiedades fisicoquímicas (apariencia, pH,
etc.) y microbiológicas (esterilidad y promoción de crecimiento) verificando
que cumplan con los requisitos de calidad establecidos y por ende demostrar que
son aptos para su uso.
OBJETIVO
Al finalizar el
trabajo práctico el estudiante estará en capacidad de: Preparar adecuadamente
medios de cultivo a partir de sus ingredientes y a partir de medios de cultivo deshidratados.
Indicar el método de esterilización apropiado
PROCEDIMIENTO
1. Leer cuidadosamente las instrucciones de
preparación del medio de cultivo asignado.
2. Pesar la cantidad exacta del medio
deshidratado o las porciones correctas de cada uno de los ingredientes. Cerrar
inmediatamente el frasco de medio de cultivo.
3. Disolver la porción pesada de acuerdo con
las indicaciones del fabricante. Si es necesario calentar se debe tener cuidado
de no sobrecalentar.
4. Ajustar el pH final de cada lote de medio
preparado, preferiblemente a temperatura ambiente (25°C). Para ello se debe
tomar una alícuota de 50 mL, medir el pH y de ser necesario ajustar al pH indicado utilizando HCl 0,1N o
NaOH 0,1N. Luego hacer el ajuste de pH al resto del medio de cultivo utilizando
la solución correspondiente pero 1 N.
5. Distribuir el medio de cultivo de acuerdo
a las indicaciones señaladas por el profesor.
6. Identificar el lote de medio de cultivo
preparado indicando su nombre, distribución y fecha de preparación.
7. Esterilizar de
inmediato el medio de cultivo siguiendo las instrucciones señaladas en el
trabajo práctico N° 8. Si se presenta algún inconveniente que impida su
inmediata esterilización, el medio de cultivo se puede almacenar por un periodo
máximo de 12 horas bajo refrigeración.
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