2..1.1.3. Áreas de siembra aseptica

2.1.1.3.ÁREA DE SIEMBRA ASEPTICA

Área limpia, diseñada y construida para minimizar la contaminación por partículas viables y no viables y mantenerla dentro de límites prestablecidos. Cuando se trabaja con cultivos microbianos, la técnica aséptica se utiliza para prevenir la introducción de organismos adicionales al cultivo. Un ambiente propicio para el desarrollo de microrganismos es el conjunto medio de cultivo – explante, pudiendo destruir tales cultivos; por lo cual es necesario evitar los contaminantes. Es difícil lograr cultivos completamente estériles, ya que pueden existir virus en el interior explante, pero se puede controlar a los demás organismos tomando en cuenta las siguientes normas:

a) Trabajar en ambientes adecuados.

b) Esterilizar los medios de cultivo.

c) Desinfectar superficialmente los explantes, liberándolos de bacterias y hongos

                                                         METODLOGIA

1. Fundir el medio sólido que se encuentra en 2 tubos de 22x175 con 20 mL y en 4 tubos de 16x150 con 7 mL (preparados en la sesión anterior).

2. Una vez fundido el medio, colocar los 4 tubos de 16x150 con 7 mL de medio en posición inclinada y dejar solidificar. Los 2 tubos de 22x175 con 20 mL de medio mantenerlos en baño María a 50ºC.

a) Comprobación de esterilidad.

Actividad para 1 equipo por mesa.

1. Separar el tubo en el que colocaron la tira de papel filtro impregnada con esporas de Geobacillusstearothermophylus (indicador biológico de esterilidad) y etiquetar como “estéril”

2. Separar 1 tubo con caldo y en condiciones de asepsia colocar una tira de papel filtro impregnada con esporas de Geobacillus stearothermophylus (indicador biológico de esterilidad) y etiquetar como “control”.

3. Incubar los 4 tubos a 55ºC durante 48 horas.

b) Comprobación de zona aséptica.

1. Lavar y desinfectar la mesa, delimitar el área de trabajo y encender el mechero para crear una zona aséptica.

2. Colocar las 3 cajas de Petri con TSA o gelosa nutritiva a 10 cm (Caja 1), 15 cm (Caja 2) y 20 cm (Caja 3) de distancia del mechero y dejarlas destapadas durante 30 minutos.

c) Comprobación de técnica aséptica.

1. En condiciones de asepsia vaciar el contenido de los tubos (22x175) en dos cajas de Petri de plástico y dejar solidificar.

2. Marcar la caja por el reverso, dividiéndola en 2 secciones.

3. Esterilizar el asa al mechero, dejar enfriar y trazar una estría en el sector 1.

4. Incubar el material preparado en los incisos anteriores a 27°C durante 24 horas y registrar sus resultados en el cuadro 3.

5. Guardar los medios preparados para la práctica de técnicas de siembra de bacterias.

Cuadro 3. Resultados de la comprobación de esterilización, zona y técnica aséptica