martes, 30 de octubre de 2012

2.2.6 Esterilización de material de cristalería


2.2.6 Esterilización de material de cristalería
Objetivo: Esterilizar los materiales de cristalería por el proceso de calor húmedo (Autoclave).

Introducción: El autoclave es un instrumento de laboratorio que es útil para la esterilización de cualquier material de cristalería o ya sea para la eliminación de microorganismos en medios de cultivo y materiales.

Materiales:

† Vaso de precipitado


† Probeta graduada

† Vidrio de reloj

† Varilla de cristal

† 3 cajas petri

† Matraz erlenmyer







Material de Apoyo:

† Autoclave

† Papel secante


† Cinta adhesiva

† Mesa de Laboratorio

Desarrollo:
 1)Ponerse el equipo de bioseguridad
2) Poner la mesa en un campo esterilizado
3) Alistar el autoclave
4) Tomar los materiales de cristalería para la esterilización
 5) Los materiales tomados se lavaran con agua y jabón y posteriormente  se secaran con papel secante.
6)Se envolverá cada material con papel café y posteriormente se le colocara cinta adhesiva para su aseguramiento.
7)Una vez listo el material se meterán a la autoclave a 15 lbs. de presión por 20 minutos.
8) Ya esterilizado se coloca el material en una caja.

Tiempo Realizado en el lavado del material de cristalería.
Fecha: 24-09-09   Mesa 6
Tiempo estimado: 1Hora
Matraz: 3 min.
Vasos de precipitado: 3 min.
Probeta: 2 min.
Caja petri: 1.30 min.
Vidrio de reloj: 55 segundos
Varilla de cristal: 30 segundos
Autoclave: 1) 2:00    2) 20 minutos   3)  2:20 min.


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domingo, 28 de octubre de 2012

2.2.5 ESTERILIZACIÓN POR CALOR HUMEDO


2.2.5  ESTERILIZACIÓN POR CALOR HUMEDO

Esta se realiza en autoclave, mediante vapor saturado a presión.

· AUTOCLAVE:

Aparato provisto de una llave y manómetro para regular la presión y temperatura que deseemos utilizar.

El vapor por si solo no es esterilizante. Se somete en el interior a una presión mayor que la atmosférica, que aumenta la temperatura del vapor, siendo de esta forma como se consigue la destrucción de todos los microorganismos.

Este vapor saturado debe estar sometido a una temperatura determinada y durante un tiempo necesario.

El vapor penetra en la cámara de esterilización y alcanza cierta presión: la deseada. Este vapor se condensa por contacto con los materiales fríos. Esta condensación libera calor humedeciendo y calentando simultáneamente cada material. Por ello es necesario que no haya aire en el autoclave, lo que se consigue subcionando este por medio de un sistema de vacío e introduciendo el vapor de forma muy rápida, para así forzar la salida del aire.

Materiales que pueden esterilizarse por calor húmedo:

Textiles secos: (ropas, vestidos, paños, gasas, algodones).

Materiales duros: (envases, bateas, contenedores, etc).

Materiales que no pueden esterilizarse por calor húmedo:

Todos los que contengan sustancias grasas (gasas furanizadas,). (materiales termo sensibles como gomas y plásticos).

· Esta forma de esterilización es segura y económica.

· No deja residuos tóxicos.

· Es rápida.

· Es cómoda, ya que los autoclaves son automáticos.

Desventajas:

· Corroe los materiales metálicos, estropea los cortes.

· Deteriora los materiales de goma o plástico.

· Requiere mucho tiempo para la preparación de paquetes, bultos y también requiere mucho cuidado en la carga del autoclave.

Ejemp.: Hay que colocar el material de forma adecuada, dejando espacio suficiente para la entrada del vapor saturado.

Los materiales para ser esterilizados en autoclave pueden ir envueltos en papel crepé, papel tejido sin tejer y mixto (tejido sin tejer + film plástico), este es poroso y permite el paso del vapor, impidiendo posteriormente el paso del aire. Telas (renselina, hilo, algodón), son poco duraderos y no garantizan la protección, al ser muy porosos. Bombonas metálicas (están desechándose, pues la penetración del vapor no es del todo uniforme. Cajas metálicas y Contenedores (son muy útiles y eficaces. Tienen unos filtros de papel bacteriostáticos en las zonas perforadas, que ofrecen todas las garantías de hermeticidad.

Temperatura Tiempo

121º 15´

126º 10´

134º 5´

Preparación de textiles:

Utilizar solamente tejidos lavados recientemente.

En los tejidos nuevos, lavar previamente, para que pierdan el apresto, ya que este impediría la entrada del calor y la humedad (vapor).

Los paquetes se confeccionan con unas medidas estándar, con esto se pretende que el vapor, calor llegue a las partes más intimas del paquete.

Envoltura doble de tejido + papel permeable al vapor e impermeable al aire.

El papel empleado es papel crepe, tejido sin tejer o filtro, formado por micro poros que se dilatan con el calor permitiendo la esterilización y se contraen con el vacío cerrándose y manteniendo la esterilidad del producto.

Rotulado del paquete, con la fecha en la que se produce la esterilización.

No apretar los paquetes.

No sobrecargar la cámara del autoclave.

Colocar los bultos en sentido vertical, para que estos no apoyen unos sobre otros e impidan la correcta entrada del vapor.

Los paquetes no deben tocar las paredes y el suelo de la cámara del autoclave. Se colocan dentro de unas cestas metálicas y estas dentro de la cámara.

Dejar completamente libres las entradas y salidas de vapor.

Preparación de materiales duros:

Envases con tapa (botes, frascos), sujetar la tapa con cinta de autoclave (termolábil), sin cerrar con ella el recipiente.

Preparación de materiales con ranuras:

Apertura de las ranuras, para permitir la entrada del vapor. (Bombonas de gasas antiguas).

Preparación de pinzas con juntas o ranuras:

Apertura de toda articulación para permitir la entrada del vapor hasta el lugar más intimo.

Preparación de materiales con varios cuerpos, émbolos, fijadores, etc:

Se separan todos ellos, para permitir igualmente la entrada del vapor.

Preparación de artículos de vidrio:

Deben de ser vidrios resistentes al calor, los frascos no estarán llenos en su totalidad.

Los tapones de los frascos, deben ser automáticos, para favorecer la extracción del vapor de agua durante la esterilización. A su vez son un precinto seguro, cuando desciende la temperatura del autoclave.

Preparación de vajilla de laboratorio:

Debe estar bien limpio y seco.

Se colocaran sobre bandejas o gradillas, evitando las roturas.

Si es bandeja, colocar una superficie de tela o papel para proteger.

Todos los recipientes tubulares, se colocaran volcados, de lado, para facilitar la entrada del vapor y la salida del aire.

 

 

Pommerville, Jeffrey C. (2010). Alcamo’s fundamentals of Microbiology (4ta edición). Jones and Bartlett Publishers

 

 

2.2.4 FACTORES QUE INTERVIENEN EN EL PROCESO DE ESTERILIZACIÓN


2.2.4 FACTORES QUE INTERVIENEN EN EL PROCESO DE ESTERILIZACIÓN

Como es bien conocido, el éxito en el logro de esterilidad en cualquier preparación depende de muchos factores, como son la naturaleza de la sustancia que se esteriliza, el volumen contenido en cada unidad, el tamaño del recipiente y el numero de unidades que se puedan manejar en una sola operación. Por consiguiente, no se pueden dar instrucciones especificas relacionadas con el método de esterilización que se utiliza para una preparación individual; en contraposición, se presentan sugerencias generales relacionadas con los procedimientos de esterilización.En los métodos físicos de esterilización encontramos que la Mufla los factores que intervienen son el tiempo y la T°, en la Filtración son el tamaño y en el Calor Húmedo son el tiempo, T° y presión.

2.2. 3 TIPOS DE ESTERILIZACIÓN


                              2.2. 3  TIPOS DE ESTERILIZACIÓN

*      Métodos físicos

                                          

Métodos físicos

 Los métodos físicos son aquellos que no involucran el empleo de sustancias letales para los microorganismos, sino procedimientos físicos como la radiación ionizante, el calor o la filtración de soluciones con membranas que impiden el paso de microorganismos, incluyendo virus. El método más usado en esta categoría es el calor que mata microorganismos por la desnaturalización de las enzimas; el cambio resultante en la forma tridimensional de las proteínas las inactiva. La resistencia al calor varía entre los diferentes microorganismos; esta diferencia puede ser expresada como el punto térmico de muerte (PTM) el cual se define como la temperatura más baja a la cual todos los microorganismos en una suspensión líquida serán eliminados en 10 minutos.

 

Otro factor que debe ser considerado en una esterilización es el tiempo requerido. Este puede expresarse como el tiempo de muerte térmica (TMT), el cual es el tiempo mínimo para que toda bacteria en un cultivo líquido en particular sea exterminada a una temperatura determinada.

 

Ambos PTM y TMT son guías útiles que indican la severidad del tratamiento requerido para matar a una población de bacterias dada. El tiempo de reducción decimal (TRD, o valor D) es el tercer concepto relacionado con la resistencia bacteriana al calor. TRD es el tiempo, en minutos, en el cual el 90% de una población bacteriana a cierta temperatura será eliminada.

 

 

Calor húmedo

El calor húmedo es un método térmico de esterilización y mata microorganismos por la coagulación de proteínas (desnaturalización), lo que es causado por la rotura de los puentes de hidrógeno que son los que mantienen a las proteínas en su forma tridimensional;1 las proteínas por lo tanto regresan a su estrucutura secundaria, se coagulan y se convierten en proteínas no funcionales. El calor húmedo puede penetrar más rápidamente que el calor seco porque las moléculas de agua conducen mejor el calor que las moléculas de aire. Por ello el calor húmedo puede ser usado a temperaturas más bajas y menor tiempo de exposición que el calor seco.

 

Esterilización por hervor

 

Un tipo de esterilización por calor húmedo es el hervor, que matará la forma vegetativa de las bacterias patógenas, casi todos los virus y los hongos y sus esporas en diez minutos aproximadamente.

 

El flujo libre de vapor es equivalente en temperatura al creado por hervir agua. Las endoesporas y algunos virus no son destruidos tan rápido. Por eso el hervor del agua no es considerado un agente esterilizante ya que la destrucción de las esporas bacterianas y la inactivación de virus no puede ser siempre asegurada. Por ejemplo, algunas endoesporas pueden resistir este procedimiento por más de veinte horas. hay que tener en cuenta que normalmente se debe saber a que tipo de materiales tienes que exponer dicho metodo.

 

Esterilización en autoclave

 

Una esterilización segura con calor húmedo requiere temperaturas mayores a las del punto de ebullición del agua. Estas temperaturas son comúnmente alcanzadas por el vapor bajo presiones elevadas en un autoclave. Cuando la presión de un gas aumenta, la temperatura del gas aumenta proporcionalmente. Como el vapor de agua es un gas, aumentar su presión en un sistema cerrado aumenta su temperatura. Como las moléculas de agua están más energizadas, su penetración aumenta sustancialmente. Ocupar el autoclave es el método preferido para la esterilización, a menos que el material que se necesite esterilizar pueda ser dañado por el calor o la humedad. Un ejemplo de esto son algunos plástico que se pueden derretir o algunos objetos filosos los cuales pierden su filo.



 

La temperatura alcanzada en el autoclave son 121.5°C y una presión de 15(Lb/inˆ2), por lo tanto el tiempo requerido para la destrucción de la mayoría de las bacterias resistentes es aproximadamente 15 min. Para objetos más densos, serán requeridos más de 30 minutos, sin olvidar que las condiciones deben de ser controladas cuidadosamente para asegurar la correcta esterilizacion.

 

La mayor ventaja que posee este metodo de esterilizacion es que el tiempo de exposicion de los materiales a esterilizar es mas corto que el calor seco.

 

 Esterilización por autoclave de vacío

 

En años recientes se ha desarrollado un nuevo autoclave que se denomina «autoclave de vacío». Esta máquina saca el aire de la cámara esterilizante al principio del ciclo. Después usa vapor saturado a temperatura de 132°C a 134°C y presión de entre 28 y 30 lb/inˆ2. El tiempo de esterilización se ve reducido a aproximadamente cuatro minutos. Finalmente, una bomba de vacío opera para eliminar el vapor y secar la carga. Las principales ventajas de este autoclave son que reduce el tiempo de exposición para la esterilización por lo que reduce el tiempo del ciclo completo.

 

                                             Esterilización fraccional

 

En años anteriores al desarrollo del autoclave, líquidos y otros objetos fueron esterilizados por la exposición de flujo de vapor a 100°C durante 30 minutos y 3 días de sesiones sucesivamente, con periodos de incubación en un cuarto térmico entre cada exposición al vapor. El método fue llamado «esterilización fraccional» porque cada día se esterilizaba una porción del objeto. También se lo denominó «tyndallisación», por su creador John Tyndall

*      MÉTODOS QUIMICOS

                                                           Métodos químicos

 Los métodos químicos de esterilización son aquellos que involucran el empleo de sustancias letales para los microorganismos, tales como el óxido de etileno y el peróxido de hidrógeno. El uso de este método es muy limitado para la Industria Alimentaria pero muy utilizado en otras industrias como la farmacéutica por ejemplo.

En química se denomina alcohol (del árabe al-kuḥl الكحول, o al-ghawl الغول, "el espíritu", "toda sustancia pulverizada", "líquido destilado") a aquellos compuestos químicos orgánicos que contienen un grupo hidroxilo (-OH) en sustitución de un átomo de hidrógeno enlazado de forma covalente a un átomo de carbono. Si contienen varios grupos hidroxilos se denominan polialcoholes.

 Los alcoholes pueden ser primarios, secundarios o terciarios, en función del número de átomos de hidrógeno sustituidos en el átomo de carbono al que se encuentran enlazado el grupo hidroxilo. A nivel del lenguaje popular se utiliza para indicar comúnmente una bebida alcohólica, que presenta etanol, con fórmula química CH3CH2OH

 

 

File:Ethanol-2D-skeletal.svg

 



 

 

Alcohol isopropílico, también llamado 2-propanol, propan-2-ol, es un alcohol incoloro, inflamable, con un olor intenso y muy miscible con el agua. Su fórmula química semidesarrollada es H3C-HCOH-CH3 y es el ejemplo más sencillo de alcohol secundario, donde el carbono del grupo alcohol está unido a otros dos carbonos. Es un isómero del propanol

 

                                       ALDEHIDOS

Los aldehídos son compuestos orgánicos caracterizados por poseer el grupo funcional -CHO. Se denominan como los alcoholes correspondientes, cambiando la terminación -ol por -al : Es decir, el grupo carbonilo C=O está unido a un solo radical orgánico.

 Se pueden obtener a partir de la oxidación suave de los alcoholes primarios. Esto se puede llevar a cabo calentando el alcohol en una disolución ácida de dicromato de potasio (también hay otros métodos en los que se emplea Cr en el estado de oxidación +6). El dicromato se reduce a Cr3+ (de color verde). También mediante la oxidación de Swern,

la que se emplea dimetilsulfóxido, (DMSO), dicloruro de oxalilo, (CO)2Cl2, y una base. Esquemáticamente el proceso de oxidación es el siguiente:

 Etimológicamente, la palabra aldehído proviene del latín científico alcohol dehydrogenatum (alcohol deshidrogenado).

 

                                  FORMALDEHIDO

El formaldehído o metanal es un compuesto químico, más específicamente un aldehído (el más simple de ellos) es altamente volátil y muy inflamable, de fórmula H2C=O. Fue descubierto en 1867 por el químico sirio Jhon Alchaer. Se obtiene por oxidación catalítica del alcohol metílico. A temperatura normal es un gas (en C.N.P.T.) incoloro de un olor penetrante, muy soluble en agua y en ésteres. Las disoluciones acuosas al ≈ 40 % se conocen con el nombre de formol, que es un líquido incoloro de olor penetrante y sofocante; estas disoluciones pueden contener alcohol metílico como estabilizante. Puede ser comprimido hasta el estado líquido; su punto de ebullición es -21 °C.

 

 

Tiene muchos nombres (ver tabla principal); su nombre tradicional proviene de formica, el nombre latín de hormiga; su nombre según la nomenclatura sistemática de la IUPAC es metanal

                         

 

 

 

   GLUTARLADEHIDO

 

El glutarladehído es un compuesto químico de la familia de los aldehidos que se usa principalmente como desinfectante de equipos médicos y odontológicos así como de laboratorio

Características

 El glutaraldehído es un líquido oleaginoso generalmente sin color o ligeramente amarillento y con un olor acre. Es un compuesto estable sin riesgo de polimerización.

 

                                                     Usos

 El glutaraldehído es un potente bactericida y en su forma alcalina, en forma diluida mezclada con agua en concentraciones del 0.1% al 1.0%, se usa como desinfectante en frío de equipo médico y científico que es sensible al calor, incluyendo los instrumentos de diálisis y de cirugía, los frascos de succión, broncoscopias, endoscopias, y el instrumental de oído, nariz, y garganta. Su efectividad es más limitada frente a algas y hongos.

El fenol en forma pura es un sólido cristalino de color blanco-incoloro a temperatura ambiente. Su fórmula química es C6H5OH, y tiene un punto de fusión de 43 °C y un punto de ebullición de 182 °C. El fenol es un alcohol, debido a que el grupo funcional de los alcoholes es R-OH, y en el caso del fenol es Ar-OH. El fenol es conocido también como ácido fénico o ácido carbólico, cuya Ka es de 1,3 · 10-10. Puede sintetizarse mediante la oxidación parcial del benceno.

 

Industrialmente se obtiene mediante oxidación de cumeno (isopropil benceno) a hidroperóxido de cumeno, que posteriormente, en presencia de un ácido, se escinde en fenol y acetona, que se separan por destilación.

 

 

                                               FENOL

El fenol es una sustancia manufacturada. El producto comercial es un líquido. Tiene un olor repugnantemente dulce y alquitranado.

 

Se puede detectar el sabor y el olor del fenol a niveles más bajos que los asociados con efectos nocivos. El fenol se evapora más lentamente que el agua y una pequeña cantidad puede formar una solución con agua. El fenol se inflama fácilmente, es corrosivo y sus gases son explosivos en contacto con la llama.

 

El fenol se usa principalmente en la producción de resinas fenólicas. También se usa en la manufactura de nylon y otras fibras sintéticas. El fenol es muy utilizado en la industria química, farmacéutica y clínica como un potente fungicida, bactericida, sanitizante, antiséptico y desinfectante, también para producir agroquímicos, bisfenol A (materia prima para producir resinas epoxi y policarbonatos), en el proceso de fabricación de ácido acetilsalicílico (aspirina) y en preparaciones médicas como enjuagues bucales y pastillas para el dolor de garganta

 

                                              REFERENCIAS

 1.↑ Archundia García, Abel (1997). «Capítulo 4: Esterilización y antisépticos». Educación quirúrgica para el estudiante de ciencias de salud. México: Méndez-editores. pp. 81-109. ISBN 968-6596-20-8. OCLC 39719626. «ISBN 9789686596205»

 2.↑ (Autor del capítulo) (29-ago-2011). Dr. Jesús Tápia Jurado; Dr.Abel Archundia García; Dr. Wulfrano Antonio Reyes Arellano. eds. Introducción a la cirugía. México: McGraw-Hill. 20-sep-2011. pp. (Pags). ISBN 978-607-02-2469-0.

 3.↑ Esterilización http://www.soportehospitalario.com.ar/propia.htm

 Tortora, Gerard J (2004). Microbiology “An Introduction” (8va edición). Pearson Prentice Hall.

 

2.2 ESTERILIZACIÓN


2.2 ESTERILIZACIÓN

2.2.1 GENERALIDADES

La esterilización es un método de control del crecimiento microbiano que involucra la eliminación de todas las formas de vida microscópicas, incluidos virus y esporas, la temperatura utilizada para la destrucción de los mismos, es de 100 °C en adelante. Es un término absoluto que implica la pérdida de la viabilidad mediante la destrucción de todos los microorganismos contenidos en un objeto, área específica o sustancia, acondicionando de tal modo la posterior propagación o contaminación a otros objetos o al medio ambiente.

 

Los agentes que matan microbios son denominados microbiocidas (cida= “matar”) o más comúnmente denominados “germicidas”. Si el agente específicamente destruye bacterias, es llamado bacteriocida; si mata hongos es denominado fungicida. Como sea después de exponer el objeto esterilizado al aire o a sus alrededores, éste otra vez se habrá contaminado con microorganismos.

 

Se trata de un término probabilístico, de modo que tras un adecuado proceso de esterilización, se debe llegar a una probabilidad de encontrar microorganismos igual o menor que una unidad contaminada en un millón de unidades sometidas a un proceso de esterilización.

 

Los métodos térmicos de esterilización son comúnmente los más utilizados para eliminar los microorganismos, incluyendo las formas más resistentes como lo son las endoesporas.

 

1.↑ Tortora, Gerard J (2004). Microbiology “An Introduction” (8va edición). Pearson Prentice Hall.

 2.↑ Pommerville, Jeffrey C. (2010). Alcamo’s fundamentals of Microbiology (4ta edición). Jones and Bartlett Publishers

 

 

 

 

2.1.6 Preparación de los medios de Cultivo

 

2.1.6 Preparación de los medios de Cultivo

 

Entre los factores más importantes a tener en cuenta para lograr la respuesta morfológica deseada en un cultivo de tejido in vitro, es la composición del medio de cultivo. El medio de cultivo está conformado por macro y micronutrientes esenciales para la supervivencia de la planta, nutrientes (hidratos de carbono, vitaminas), agentes reguladores del crecimiento y hormonas vegetales, que ayudarán a obtener, una planta completa, o un órgano vegetal en particular, a partir del explante elegido (en condiciones de asepsia) y algún agente gelificante.

 

Ejemplo: Preparar 400 mL De Un Medio MS (1x), partiendo de soluciones concentradas de sales y orgánicos a 100x, añadiendo 30g / L de sacarosa y 2.7g / L de Phytagel. Añadiendo 0.5 ppm / L De A.N.A a una concentración de 1000 ppm.

 

 


 
 
 


 


 

Este mismo procedimiento es el que se lleva acabo para todas ( 2) solución de sulfatos, 3) solución de quelatos 4) solución de Po, Bo y Mo, 5) solución de halógenos y 6) solución de orgánicos) las soluciones por lo que no es necesario repetirlo.




7) A.N.A

V2 = V1.C1/C2

V2 = (400 mL)(0.5 ppm)

1000ppm

V2 = 0.2 mL

 

8) PHYTAGEL

(2.7 g)(400 mL)/ 1000 mL = 1.08 g

 


 
 



 


 


 


 

Estos posteriormente se esterilizan y quedaran aptos para el cultivo in vitro vegetal.

 





Bibliografía:

http://www.google.com.mx/imgres?q=frascos+con+medios+de+cultivo&.com