2.1.3.1 DEFINICIÓN DE MEDIOS DE CULTIVOS
2.1.3.2 TIPOS DE MEDIOS DE CULTIVOS
1. Concepto De Medio De Cultivo
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Los medios de cultivo son soluciones acuosas
donde se desarrollan los microorganismos. El desarrollo de los
microorganismos solo ocurre en presencia de los nutrientes requeridos
(que dependen del microorganismo particular).
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Nutrientes
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Los nutrientes son las sustancias necesarias para
la síntesis de material celular y la obtención de energía. Estos nutrientes
son orgánicos e inorgánicos (solo las organismos litotrofos pueden
crecer en soluciones exentas de nutrientes orgánicos).
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La diversidad del mundo microbiano hace que los
medios de cultivo sean muy variados, tanto como determinen los requerimientos
nutricionales de los microorganismos. Para el cultivo de bacterias
heterótrofas todos los medios contienen como componentes principales:
agua, sustancias orgánicas y sustancias inorgánicas.
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Otros componentes
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Algunos medios de cultivo incorporan sustancias
con finalidades mas concretas, como los factores de crecimiento,
colorantes, tampones, agentes solidificantes, etc.
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2. Componentes De Los Medios De Cultivo
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2. Componentes De Los Medios
De Cultivo
Los componentes de un medio de cultivo dependen
del microorganismo que se pretende cultivar y de la finalidad del cultivo. A
continuación se describe que es general la necesidad de utilizar :agua,
sustancias orgánicas y sustancias inorgánicas. Los medios de cultivo sólidos llevan además un
agente solidificante
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2.1. Agua.
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Suele utilizarse destilada. En ocasiones
específicas puede utilizarse agua corriente, pero debe evitarse porque
ciertos cationes (como Ca2+ o Mg2+) pueden formar sales
insolubles con otros componentes del medio (como los fosfatos) sobre todo,
durante la esterilización.
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2.2. Sustancias orgánicas.
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Se pueden utilizar sustancias puras o mezclas
de sustancias orgánicas Como sustancias puras más comunes se encuentran los azúcares:
Frecuentemente son utilizados como fuente de carbono y energía por los
microorganismos. Entre ellos, es común el empleo de monosacáridos como la
glucosa, disacáridos como la lactosa y polisacáridos como el almidón. Ciertas
bacterias no pueden utilizar los carbohidratos como nutrientes y se emplean
otras sustancias puras (aminoácidos, ácidos grasos) o mezclas
de sustancias orgánicas.
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Cuando los requerimientos nutricionales de los
microorganismos son complejos o se pretende un crecimiento rápido se utilizan
mezclas de sustancias orgánicas. Las mezclas de sustancias orgánicas
más comunes en la preparación de los medios de cultivo son las peptonas, el
extracto de carne y el extracto de levadura
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PEPTONAS: mezclas
de aminoácidos y péptidos. Resultan de la hidrólisis de proteínas o
materiales proteicos (carne, vegetales, caseína, o gelatina).
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EXTRACTO DE CARNE: concentrado de componentes hidrosolubles de la carne.
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EXTRACTO DE LEVADURA: Se obtiene por hidrólisis ácida o enzimática de levaduras
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Las peptonas y los extractos de carne y de
levadura se utilizan preferentemente como fuente de nitrógeno, fósforo y
azufre orgánicos. Algunos de sus componentes se pueden utilizar como factores
orgánicos de crecimiento o como fuente de carbono y energía.
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2.3. Sustancias inorgánicas(sales
minerales)
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Sus funciones en un medio de cultivo pueden ser
poco específicas,(como el NaCl para ajustar la osmolaridad del medio)
o pueden ser requeridas específicamente en el metabolismo (como las
sales de K+, Mg2+, Ca2+, Fe3+,
etc.).
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Quizá los requerimientos minerales mas obvios son
los de fósforo (necesario para la síntesis de ácidos nucleicos y
fosfolípidos), de azufre (aminoácidos cisteina y metionina) o nitrógeno
(el segundo elemento tras el carbono entre los que forman la célula). Aunque
se pueden utilizar fuentes orgánicas, es común usar como fuente de
fósforo un fosfato, la de azufre como un sulfato y la de nitrógeno como
nitrato o una sal de amonio.
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Micronutrientes
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Ciertos micronutrientes (los nutrientes
necesarios en pequeñas cantidades) son esenciales para el funcionamiento de
varias enzimas, y deben estar incluidos en el medio de cultivo. Su
requerimiento en muy baja cantidad determina que frecuentemente no sea
necesario añadirlos expresamente: es suficiente su presencia como
contaminantes de otros componentes. No obstante si se utilizan componentes y
agua de pureza muy altas los medios de cultivo pueden ser deficientes en
micronutrientes
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2.4.Agentes solidificantes; Agar-agar
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Se añaden para preparar medios de cultivo sólidos
y semisólidos. El agar-agar es el agente solidificante mas común. El agar-agar
es un polisacarido de galactosa y galactomanano que se obtiene de las algas
rojas (Echema, Gelidium, Gracilaria). Contiene un 70% de agarosa y un
30% de agaropectina. El agar-agar es el agente solidificante más utilizado.
Su composición química es indefinida y solidifica con mayor dificultad a
medida que desciende el pH. Es insoluble en agua fría, pero se funde y
solubiliza en agua hirviendo y solidifica a 45 oC. Forma geles transparentes
muy estables y es degradado por muy pocas bacterias.
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Gel de sílice
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Para el cultivo de bacterias autótrofas estrictas
y para la elaboración de medios de cultivo definidos se utiliza gel
de sílice o silicogel, silicato de sodio o potasio (usado al 10%). Se
utiliza poco. Sus inconvenientes mas importantes son la dificultad para su
incorporación a los medios de cultivo, que solidifica a pH ácido y su coste.
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