3.4.3. Fusión de protoplastos

3.4.3. Fusión de protoplastos

Protoplasto:

 

Célula vegetal desprovista de pared celular, por proceso mecánico o enzimático. Membrana plasmática completamente expuesta. Estado transitorio, permite manipulación de esas células. Mantiene potencialidades de células vegetales completas.

·         1892  Primer aislamiento de protoplastos vivos de cebolla por métodos mecánicos.

 

·         1919 Primer aislamiento enzimático, células de levadura.

 

·         1960 Aislamiento de protoplastos de plantas superiores con degradantes de pared celular.

 

·         1971 Regeneración de plantas a partir de protoplastos de Nicotiana tabacum.

 

 

 

 

 

Aplicaciones

 

·         Producción de híbridos por fusión de protoplastos.

 

·         Manipulaciones genéticas.

 

·         Estudio de procesos fisiológicos y bioquímicos.

 

 

Metodología

 

1. Aislamiento y factores que lo afectan

2. Purificación

3. Determinación de viabilidad

4. Cultivo

5. Regeneración

 

 

 

1) Factores que afectan la producción y viabilidad de los

protoplastos

_Fuente de material

_Tratamientos pre-enzimáticos

_Tratamientos enzimáticos

_Osmolaridad

 

 

2) Purificación

 

 

3) Viabilidad

Toma de oxígeno

Actividad fotosintética

Tinciones

 

4) Cultivo

Medio de cultivo: MS, B5 (líquido o sólido)

Osmolaridad

Densidad de plaqueo

Condiciones de almacenamiento

Material vegetal

 

 

 

5) Regeneración

Organogénesis/Embriogénesis somática

Eficiencia generalmente baja